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通过LC3-Ⅱ水平看细胞自噬的发生

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-07-20     
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自噬(autophagy)是在真核细胞中,过量或异常的细胞器被双膜泡隔离并交付给溶酶体/液泡后被降解,回收利用细胞性物质及清除受损细胞器或有害的蛋白质的过程。自噬的过程包括隔离膜(isolation membrane)或自噬前体(pre-autophagosome)的形成及延伸、自噬体(autophagosome)的形成、自噬体和溶酶体融合后形成自噬溶酶体(autolysosome),最终胞内物质降解,产生的降解产物如氨基酸、脂肪酸等可被细胞再利用。

 

自噬.jpg

 

自噬在维持细胞内稳态发挥重要的生物学作用:①应对外源性刺激,自身降解重新获得生长所需营养物质。②细胞自我更新,降解胞内衰老蛋白和细胞器后重新合成蛋白和细胞器。③防御性清除胞内受损大分子物质,维持细胞正常功能。

 

既然自噬对维持细胞稳态如此重要,那么,自噬检测怎么做呢?说到这里就不得不提到公认的自噬标志物——微管相关蛋白1的轻链3(microtubule-associated-proteinlight-chain-3,LC3)。正常情况下,LC3以未脂化的可溶性形式存在于胞浆中,被称为LC3-Ⅰ,其分子量为18kDa。自噬形成时,LC3-Ⅰ酶解转化成为膜型LC3,又被称为LC3-Ⅱ,其分子量为16kDa。LC3Ⅱ在聚丙烯酰胺凝胶上表现出的迁移率高于LC3-Ⅰ,LC3-Ⅱ与噬小体/自噬溶酶体的数量呈正相关,所以LC3-Ⅱ被广泛地应用于定量细胞自噬的活性。

 

作为专业的生命科学医药原料供应商,Cell Biolabs中国区金牌代理,艾美捷科技为您推荐:细胞自噬分析检测试剂盒!

货号CBA-5115
名称Autophagy Immunoblot Kit (LC3-II Detection)
自噬免疫印迹试剂盒(LC3-II 检测)
检测方法WB
结果图

自噬免疫印迹试剂盒(LC3-II 检测).png


泳道 2:HeLa 对照裂解液(未去除胞质 LC3)
泳道 3:氯喹处理的HeLa 裂解液(未去除胞质 LC3)
泳道 4:HeLa 对照裂解物(去除胞质 LC3)
泳道 5:氯喹处理的HeLa 裂解液(去除胞质 LC3)
 
货号CBA-5116
名称Autophagy ELISA Kit (LC3-II Quantitation)
自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量)
检测方法ELISA(检测细胞裂解液)
结果图

自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量).png

 
货号CBA-5117
名称Cellular Autophagy ELISA Kit (LC3-II Quantitation)
细胞自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量)
检测方法基于细胞的ELISA
结果图

细胞自噬ELISA检测试剂盒(LC3-II定量).png

 

LC3-GFP.png

 

LC3与绿色荧光蛋白(GFP)结合成LC3-GFP显示出与LC3相同的过程,并且可通过监控液泡输送和GFP-LC3后续的分解而示踪自噬通量。当自噬通量正常,存在于自噬体内部的GFP-LC3在自噬体膜融解且暴露于液泡水解酶的内容物被裂解。GFP-LC3的蛋白水解可释放出一个完整的GFP部分,因其对降解有相对抗性,可作为自噬产物累积在液泡。自由的GFP水平增加可被检测且可通过Western印迹分析进行定量,并与自噬率相关。GFP是酸敏感型GFP蛋白,由于自噬溶酶体内部的酸性环境,可以导致pH下降、GFP淬灭,因此,GFP的强弱可指示自噬溶酶体形成的顺利程度。除了以上LC3-II检测试剂盒,Cell Biolabs当然还可以提供GFP-LC3表达质粒(cat#CBA-401):

 

GFP-LC3表达质粒.png


左侧是pCMV-GFP对照质粒;右侧是pCMV-GFP-LC3表达质粒


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作为一家具有高端的技术实力、先进的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技企业,为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,企业组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!

 

艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商优保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abbexa、Abnova、Agrisera、Anogen、Biosensis、Biovision、BioVendor、Caisson Labs、Cell Biolabs、Cytoskeleton、Demeditec、Duchefa、Epigentek、Equitech-Bio、EXBio、Fitzgerald、GeneCopoeia、Hycult Biotech、ImmunoReagents、ImmunoStep、Jackson、LifeSensors、LigaTrap、Lumiprobe、Mabtech、Matreya、Norgen Biotek、Origene、ProImmune、ProSpec、ScyTek、Solis BioDyne、SouthernBiotech、StressMarq、SySy、US Biological、TRC等,可以在短时间内为用户提供专业的前沿资讯、完备的产品及物流服务。

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